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Technologien
Massenspektrometrie
Das Massenspektrometer der Firma Waters (Q-ToF Premier mit µPLC) besitzt eine Online-Koppelung von
HPLC und ESI-MSMS und ist mit einer Kapillar-HPLC und einer NanoLock-Spray Quelle ausgestattet.
Es können Peptide im unteren fmol-Bereich bei Auflösungen von 10000 FWHM nachgewiesen werden. Zu den
beabsichtigten Experimenten gehören die automatisierte Analyse von Peptidgemischen, z.B. nach Verdau
von Proteinen mit verschiedenen Proteasen in vitro oder nach Extraktion von Peptiden aus Tumormaterial.
Eine hohe Massengenauigkeit erlaubt hier in vielen Fällen eine direkte Identifizierung der Peptidsequenz
und somit der Peptidquelle. Diese Eigenschaften sind ebenfalls eine Notwendigkeit für die Untersuchungen
zur Prozessierung von CMV Antigenen (Regulation der Präsentation von CTL Epitopen) und bei Analysen zur
Bedeutung von zytosolischen und ER-residenten Aminopeptidasen bei der Herstellung von MHC Klasse I Liganden.
Molekulare Immunologie
Key services provided by the facility
This laboratory is focused on signal transduction and regulation of
gene expression in both human and murine primary T cells and murine
mast cells.
It covers all aspects of molecular cloning, primer design, qRT-PCR,
PCR-based genotyping of transgenic mice, expression of recombinant
proteins and generation of antibodies against target proteins.
In particular, techniques have been established which allow the
functional analyses of proteins which is a conditio sine qua non for
the evaluation of target mRNAs and proteins identified by genomic and
proteomic approaches.
This includes design, synthesis and functional
testing of siRNA molecules for "knock down" experiments. Biological
activity of individual siRNA molecules can be assayed by qRT-PCR, FACS
analyses and western blotting (if antibody is available).
In order to study the activation and regulation of specific promoters
and transcription factors, chromatin immunoprecipitation (ChIP),
reporter gene assays and overexpression experiments can also be
performed. The latter manipulations are based on procedures, optimized
in this laboratory, which allow high efficiency non-viral transfections
of primary human and, for the first time, conventional and regulatory
murine T cells and mast cells with siRNA molecules and plasmids.
Please contact us for additional information
Dr. Michael Stassen
Johannes Gutenberg- Universität
Institut für Immunologie
Hochhaus am Augustusplatz
55131 Mainz
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